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武汉海鲜市场肺炎病毒一席谈 2020-01-27 19:03:37

去年12月底发生在武汉的肺炎病毒在短短的一个月内, 迅速播散全国乃至全球,武汉更是重中之重,怀疑似病例数确诊病例数和死亡人数在近日增加很快。 武汉从前日开始封城,全国很多城市跟进。各种谣传尘嚣直上,阴谋论者死灰复燃。 专家没有权威的解读, 人们在焦虑中度过一天又一天。 就连我这个游子,也熬过不眠之夜,担心在武汉的亲朋好友安危。 春节期间, 适逢周末, 想用自己的生物医学知识,写一篇科普,可惜自己又不是病毒专业,知识面有限。但做总比不做好。 

不得不说,中国科学家在武汉肺炎病毒快速反应上,是非常严谨的,短短二十多天(一月十七日和一月二十三日),就完成了病毒高通全长测序,并命名为武汉海鲜市场肺炎病毒 (Wuhan seafood market pneumonia virus isolate Wuhan-Hu-1 ), 基因登记号为 MN908947 和NC_045512, 两个团队所测序的结果完全一致。由于序列的公布, 为以后的RT-PCR精准检测提供了基础。 


运用上述基因序列,德国, 日本和香港立即公布的PCR检测方案: 

1.香港方案: https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/peiris-protocol-16-1-20.pdf?sfvrsn=af1aac73_4

2.德国方案(也叫WHO方案):https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/protocol-v2-1.pdf?sfvrsn=a9ef618c_2

3.日本方案: https://www.niid.go.jp/niid/images/pathol/pdf/Detection_of_nCoV_report200121.pdf


下面抽一点时间描述这三个方案


日本方案:

上游引物:TTGGCAAAATTCAAGACTCACTTT

下游引物: CACAAAGGAATTTTTATGAACCACA

片段长度: 547bp

CTTCCACAGCAAGTGCACTTGGAAAACTTCAAGATGTGGTCAACCAAAATGCACAAGCTTTAAACACGCTTGTTAAACAACTTAGCTCCAATTTTGGTGCAATTTCAAGTGTTTTAAATGATATCCTTTCACGTCTTGACAAAGTTGAGGCTGAAGTGCAAATTGATAGGTTGATCACAGGCAGACTTCAAAGTTTGCAGACATATGTGACTCAACAATTAATTAGAGCTGCAGAAATCAGAGCTTCTGCTAATCTTGCTGCTACTAAAATGTCAGAGTGTGTACTTGGACAATCAAAAAGAGTTGATTTTTGTGGAAAGGGCTATCATCTTATGTCCTTCCCTCAGTCAGCACCTCATGGTGTAGTCTTCTTGCATGTGACTTATGTCCCTGCACAAGAAAAGAACTTCACAACTGCTCCTGCCATTTGTCATGATGGAAAAGCACACTTTCCTCGTGAAGGTGTCTTTGTTTCAAATGGCACACACTGGTTTGTAA


香港方案:

上游引物:TAATCAGACAAGGAACTGATTA

探针: CCGCAAATTGCACAATTTGC

下游引物: CATGGAAGTCACACCTTCG

片段长度: 110bp.

TAATCAGACAAGGAACTGATTACAAACATTGGCCGCAAATTGCACAATTTGCCCCCAGCGCTTCAGCGTTCTTCGGAATGTCGCGCATTGGCATGGAAGTCACACCTTCG


德国方案(WHO方案):

上游引物:GTGAAATGGTCATGTGTGGCGG

探针: CAGGTGGAACCTCATCAGGAGATGC

下游引物:TATGCTAATAGTGTTTTTAACATTTG

片段长度: 100bp

GTGAAATGGTCATGTGTGGCGGTTCACTATATGTTAAACCAGGTGGAACCTCATCAGGAGATGCCACAACTGCTTATGCTAATAGTGTTTTTAACATTTG


如果能够迅速地一步法PCR, 减少样品提取的过程, 就极大限度地可以减少医务人员的工作量,和减少交叉感染的机会。 


众所周知, 戴口罩是防止被传染的主要方法。WHO提出3M N95 1860或1870, 是最可靠的口罩。 3M的N100 可靠的阻断这个冠状病毒的口罩, 可惜非常贵。 由于国内的一些大医院院长们的开明,国际上的爱国华侨纷纷自费购买上述口罩, 捐献给一线的医护人员。我的一位朋友就一口气买了2000个,捐献给了武汉。现在美国这两型号的口罩全线缺货。 


在阻止病毒复制上,由于这个冠状病毒属于RNA病毒,目前成功用于抗RNA病毒复制的药物,主要是抗HIV的药物, 如Lopinavir and Ritonavir,初步的结果认为, 这两药物对于控制武汉冠状病毒引起的病变,有一定的疗效。 可惜这些药物很贵, 有一定的肝损伤。

 

在病毒的作用机理上, 研究者们比较集中在Ace2蛋白上。冠状病毒的Spike蛋白通过Ace2, 黏附到被感染的细胞 (请搜索www.mdpi.com,viruses-12-00135.pdf) 。Aces作为武汉冠状病毒的受体,进入细胞内复制。可以肯定,如果能够尽快设计出药物, 靶定这个受体, 有可能控制病毒扩散。 其他重要的蛋白有3C, RaTGI3(https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.01.22.914952v1.full.pdf), 本人了解不多, 所以不在这里赘述。 


武汉海鲜市场肺炎病毒的宿主可能是蝙蝠,中间宿主可能是蛇或其他动物。昨天有传, 说武汉肺炎和SARS病毒有80%同源性,是谣传。对此, 我比较了NC_045512和美国病毒库的冠状病毒序列, 其中2018年由南京军事医学研究所的Hu D, Bat SARS-like coronavirus isolate bat-SL-CoVZC45 (基因登记号MG772933.1)同源性达到87.99%, 有兴趣的朋友可以自己去进行比较。 同源性在80%以上的SARS样冠状病毒有接近100个, 这里不再赘述。 

  

 


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